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本制品是一种新型高效的T4 DNA连接酶预混液，Rapid Ligation Mix中包含基本的反应缓冲液、连接增强剂以及独特的酶保护剂和稳定剂，浓度为2×。具有高效快速、灵敏广泛、操作便捷等优点，可大大缩短连接时间、提高PCR产物的连接和克隆效率。

本制品使用方便快捷，使用时只需取适量Rapid Ligation Mix溶液，加入制备好的载体和基因片段，并加入ddH2O补足体积，使Rapid Ligation Mix溶液的浓度为1×即可，室温（22℃)进行反应，然后转化感受态。

适用范围：
·平末端的连接：平末端酶切出的载体与高保真聚合酶扩增得到的PCR产物间的连接。
·粘末端的连接：粘末端酶切出的载体与基因片段间的连接。
· T载体的连接：T载体与Taq等聚合酶扩增得到的带3'A末端片段间的连接。

试剂盒组成：

组分	WH0193-1	WH0193-2
Rapid Ligation Mix	100μl	100μl×3
ddH2O	1ml	5ml

保存条件：-20℃可保存1年

预混反应液组成：
T4 DNA连接酶（0.6U/μl)、Tris-HCl,pH8.0（100mM)、MgCl2（20mM)、DTT（20mM)、ATP（2mM)、10%PEG4000等其它稳定剂和增强剂。

使用方法：
1.建立反应体系
①按照下表的内容在离心管中加入各种成分。

成分	使用量
Rapid Ligation Mix（2×)	5μl
Vector（50ng/μl)	1 μl
目的PCR片段	X μl
ddH2O	补足至10.0 μl

②轻轻弹动离心管以混匀内容物，短暂离心3-5sec。将混合反应液置于室温（22℃)反应5min。反应结束后，将离心管置于冰上，进行后续的转化反应。
注意：
①如果插入片段长度小于1kb，反应时间可以采用5min。
②如果插入片段长度为1-2kb，反应时间可以采用5-10min。
③如果插入片段长度为2-3kb，反应时间可以采用10-20min，更长片段连接可采用30 min至过夜。
2.转化
  取部分连接产物加到50-100 μl TOP10或DH5α感受态细胞中，轻弹混匀，冰浴30 min。将离心管置于42℃水浴90 sec，取出管后立即置于冰浴中放置2-3 min，期间不要摇动离心管。向离心管中加入350 μl 37℃预热的SOC或LB（不含抗生素)培养基，180rpm、37℃振荡培养45– 60 min。吸取200 μl或适量进行涂板，37℃培养12-16h。
3.鉴定
  进行菌落PCR检测或测序鉴定。
相关搜索：T4 DNA连接酶反应液，Rapid Ligation Mix